脾由被膜、小梁、白髓、红髓、边缘区几部分组成。
脾脏的被膜较厚，被膜表面大部分还覆有浆膜。被膜和脾门的结缔组织伸入脾的实质，形成许多的小梁。这些小梁互相连接，形成了脾脏的粗支架。小梁间的网状组织结构则形成了脾淋巴组织的细微支架。被膜和小梁内的平滑肌细胞可以通过舒张或邹缩调节脾的含血量。
脾脏内的白髓位于脾内小动脉的周围，由靠外的含有B细胞和CD4+T细胞的边带和内部围绕血管形成的淋巴鞘两部分构成。因为该部分在脾的新鲜切片上呈散布的灰白色小点状，故名“白髓”。另外，正常人体内含量很少、主要由B细胞构成的脾小结也是白髓的一部分。
红髓则占到了脾实质的三分之二，因为红髓含有大量的红细胞，所以显红色。红髓由脾索和脾窦两部分组成。其中，脾索由富含血细胞的索状淋巴组织构成，大部分穿过它的血液都能够穿过它重新回到循环系统，惟衰老的红细胞和血小板以及异物会在此被吞噬。血窦则充满了血液，抗原和淋巴细胞均是通过它进入脾脏的。脾窦壁附近有不少巨噬细胞，它们的凸起可以伸入脾窦的腔内。
脾还有一种名为“边缘区”的结构。该结构是红髓和白髓的交界处，宽达100微米。其中的淋巴细胞分布比白髓稀疏，但比红髓要密一些。从胸腺或骨髓迁入脾的淋巴细胞会在这里进一步成熟。该区域有大量的巨噬细胞，可对抗原进行处理。B细胞通常会在这里开始活化。边缘区是脾内首先捕获、识别抗原的区域，是引发免疫反应的重要部位，也是血液中淋巴细胞进入脾内淋巴组织的重要通路。
值得注意的是，脾没有输入淋巴管，脾内也没有淋巴窦，取而代之的是大量的血窦（脾窦）。