[急性早幼粒细胞白血病论文]自身淬灭荧光定量PCR检测慢性粒细胞

本文作者：彭辉；冯文莉；王小中；曾建明；肖青；潘健；曹唯希；罗云萍；黄宗干；成功正常投稿发表论文到《中华检验医学杂志》2007年11期,引用请注明来源400期刊网！

【摘要】：目的利用自身淬灭探针技术建立一种能检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl融合基因mRNA的实时荧光定量PCR方法,为CML的诊断、疗效观察以及微量残留白血病(MRD)的监测提供有效手段。方法用逆转录PCR方法(RT-PCR)扩增K562细胞的bcr/abl融合基因,A-T克隆法构建定量标准模板;设计自身淬灭荧光引物(探针),建立自身淬灭荧光定量逆转录PCR方法(FQ-RT-PCR),并对该方法的线性检测范围、灵敏度、重复性、稳定性进行检测;然后检测临床白血病患者骨髓标本bcr/ablmRNA。结果建立的FQ-RT-PCR方法可检测10copies/μl的bcr/abl重组质粒,并能从10~5个正常细胞中检出1个白血病细胞,该方法的批内、批间变异系数(CV)分别为2.1%、6.1%,线性检测范围为10~2～10~9copies/μJ。25例CML患者bcr/abl融合基因mRNA表达量中位数为4.50×10~4[(0.45～89.00)×10~4]copies/μgRNA,其中11例慢性期初诊患者bcr/ablmRNA表达量中位数为5.45×10~4[(2.95～19.30)×10~4]copies/μgRNA,6例急变期患者bcr/ablmRNA表达量中位数为13.00×10~4[(4.10～89.00)×10~4]copies/μgRNA,8例慢性期治疗后复查患者bcr/ablmRNA表达量中位数为2.35×10~4[(0.45～5.12)×10~4]copies/μgRNA,CML急变期患者bcr/abl融合基因表达水平与慢性期患者之间差异有统计学意义(q=3.41,P0.05)。PCR产物经电泳分析,其中21例CML患者为b3a2型,4例CML患者为b2a2型;3例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中,1例有bcr/ablmRNA表达,为b2a2型。结论所建立的基于自身淬灭探针技术的实时荧光定量PCR检测方法灵敏、特异、重复性好,结果用拷贝数表示,准确可靠,利于标准统一。可广泛用于CML的诊断、疗效观察以及MRD的监测。
【论文正文预览】：由染色体t(9:22)(q32;qll)所形成的ber/abl融合基因是慢性粒细胞白血病(。hroni。myeloidleukemia,CML)患者特征性的分子标志,也存在于部分急性淋巴细胞白血病(aeutelymphoeytieleukemia,ALL)患者中。既往多用逆转录一聚合酶链反应(RT一PCR)检测bcr/abl融合基因〔‘〕,但此
【文章分类号】：R733.7
【稿件关键词】：聚合酶链反应自身淬灭探针白血病粒细胞慢性期bcr/abl融合基因
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【稿件标题】：[急性早幼粒细胞白血病论文]自身淬灭荧光定量PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/ablmRNA
【作者单位】：重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室、重庆市重点实验室重庆医科大学附属第二医院检验科;重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室、重庆市重点实验室;重庆医科大学附属第一医院血液科;
【发表期刊期数】：《中华检验医学杂志》2007年11期
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