摘要：研究了长枝木霉﹙Trichodermalongibrachiatum﹚菌株T05的生物学特性，包括不同培养条件对菌丝生长和分生孢子萌发的影响。结果表明：T05在PDA、MEA、查彼和基本培养基上都能生长，以在PDA上菌丝生长最快。在PDA上，菌丝生长的温度范围是15~35oС，最适温度为25oС；pH值为4~10，最适pH=6。在基本培养基上，菌丝生长的最佳碳源是葡萄糖、最佳氮源是蛋白胨、最佳维生素是VB1。分生孢子萌发需要一定的营养，当其分别在PDB、2%蔗糖水和自来水中时，以在PDB中的孢子萌发率最高。在PDB中，分生孢子萌发的温度范围是15~35oС，最适温度为25oС；接种后8h就有15%的萌发率，在16~24h内萌发率为25.33%~46.12%。
关键词：长枝木霉；生物防治；生物学特性；菌丝生长；分生孢子萌发
分类号S718.81
木霉菌﹙Trichodermaspp.﹚是一类广泛存在于土壤、根围、叶围、种子和球茎等环境中、并具有重要生防价值的有益丝状真菌［12］，具有广谱性、适应性强和多机制性的特点。木霉生长速度快、环境友好，并对植物有促生作用，是具有生物农药和生物肥料开发价值的真菌。木霉对多种植物病害都具有良好的生物防治效果［34］，不同种类的木霉在生物学特性方面差异很大，甚至同种的不同菌株间也有差异［5］。对特定的具有良好生防潜力的菌株进行生物学特性的研究可以了解该菌株生长的适宜条件，生存的极限条件及在不同基质上的生长、产孢能力［68］，可为进一步研究液态发酵的产孢条件奠定基础。本试验对具有良好生防潜力的长枝木霉﹙T.longibrachiatum﹚菌株T05进行了生物学特性研究，笔者已经研究了其培养特性，得知该菌株在PDA平板培养基上生长较快，产分生孢子较早且多，也能产生厚垣孢子；在MEA上培养基上能产生分生孢子，但不产生厚垣孢子，本试验在此基础上，测定了其在不同培养基、不同温度、不同pH值和不同营养等条件下菌丝生长的情况，以及不同温度、营养和时间对分生孢子萌发的影响，为进一步的发酵产孢研究奠定基础。
1材料与方法
1.1菌种来源和培养基
长枝木霉菌株T05是自我采集、自行分离得到的1株木霉菌株，保存在东北林业大学森林病虫病理实验室。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏﹙保藏号：CGMCCNo.2888﹚。培养基：PDA﹙去皮马铃薯200g煮汁，葡萄糖20g，琼脂20g，加水定容至1L﹚；MEA﹙麦芽糖20g，琼脂20g，加水定容至1L﹚；查彼培养基﹙KNO3为2.00g，KH2PO4为1.00g，KCl为0.50g，MgSO4•7H2O为0.50g，FeSO4为0.01g，蔗糖30.00g，琼脂20.00g，蒸馏水1L﹚；基本培养基﹙葡萄糖20.00g，天门冬素2.00g，KH2PO4为1.00g，ZnSO4•7H2O为0.10g，MgSO4•7H2O为0.50g，Fe2﹙SO4﹚3•7H2O为0.50g，MnSO4•4H2O为0.10g，VB1为0.10g，琼脂20.00g，蒸馏水1L﹚；PDB﹙去皮马铃薯200g煮汁，葡萄糖20g，加水定容至1L﹚。
1.2不同培养基对菌丝生长的影响
选用PDA、MEA、查彼和基本培养基，制好平板后，在中心接种T05同质等量的菌丝块，在25oС下恒温培养至48h，分别在24、48h测量菌落直径大小以检测菌丝生长速度，并观察记录菌株的形态特征、菌落颜色变化等。每个处理均设3个重复。对培养48h的菌落生长直径，采用方差分析F检验差异显著性。
1.3不同温度和pH值对菌丝生长的影响
在PDA平板培养基中心接种T05，分别在4、10、15、20、25、30、35、37、40oС下培养2~3d，测量菌落生长直径，检测不同温度条件对菌丝生长的影响。用1mol•L1的NaOH和HCl，调节液体时的PDA培养基的pH值分别为4、5、6、7、8、10，制成平板后在25oС下培养T05的菌丝2~3d，测量菌落生长直径，检测不同pH值对菌丝生长的影响。
1.4不同营养对菌丝生长的影响
1.4.1不同碳源、不同氮源对菌丝生长的影响分别用等量的乳糖、麦芽糖，置换基本培养基中的葡萄糖，配成不同碳源的培养基，以基本培养基作对照，在25oС下培养2~3d，测量菌落生长直径，检测不同碳源对菌丝生长的影响。分别用等量的蛋白胨、谷氨酸、亮氨酸、牛肉浸膏、NaNO3、﹙NH4﹚3PO4、尿素，置换基本培养基中的天门冬素，配成不同氮源的培养基，并设无氮作对照，在25oС下培养2~3d，测量菌落生长直径，检测不同氮源对菌丝生长的影响。1.4.2不同维生素对菌丝生长的影响分别用等量的VB2、VB6和烟酸，置换基本培养基中的VB1，配成含不同维生素的培养基，在25oС下培养2~3d，测量菌落生长直径，检测不同维生素对菌丝生长的影响。
1.5不同温度、不同营养、不同时间对孢子萌发的影响
将菌种接于PDA培养基上，在25oС下培养，5d后用PDB冲洗培养基配成木霉菌株分生孢子悬浮液，每个视野60~80个孢子。分别置于1.5mL离心管中，每管加PDB1mL，分别在15、25、30、35oС下进行孢子萌发试验，24h后观察和统计孢子萌发率。分别用PDB、2%蔗糖水、自来水3种培养液，进行孢子萌发试验，在25oС下培养24h，统计孢子萌发率。在PDB中25oС下分别培养8、12、16、20、24h，观察和统计孢子萌发率。
2结果与分析
2.1培养基对菌丝生长的影响
由表1所示，长枝木霉菌株T05于25oС时在4种培养基上均能生长。方差分析和多重比较的结果表明，基本培养基、查彼和MEA培养基对菌丝生长的影响没有显著差异，但PDA与MEA和查彼培养基之间对菌丝生长的影响有显著差异，以在PDA培养基上生长最快。
2.2温度和pH值对菌丝生长的影响
由表2、表3所示，在PDA培养基上，菌株T05菌丝生长的温度范围是15~35oС，最适温度为25oС。不同温度对菌丝生长的影响差异多数显著，只是25~30oС时差异不明显；T05在pH值4~10范围内均能生长，其中pH值为6时菌丝生长最快，与pH值为4和10时有显著差异，但pH值在6~8时差异不显著。
2.3营养对菌丝生长的影响
2.3.1碳源、氮源的影响由表4、表5所示，在基本培养基上，3种碳源对菌株T05菌丝生长无显著影响，其中葡萄糖最有利于菌丝生长；8种氮源中蛋白胨最有利于T05菌丝生长，与其他氮源和无氮对照对菌丝生长的影响极显著。2.3.2维生素的影响由表6所示，4种维生素对菌丝生长的影响不同。VB1最有利于菌株T05的菌丝生长，VB1与VB6之间对菌丝生长的影响不显著，但VB1与VB2和烟酸之间对菌丝生长的影响有较显著差异。
2.4不同温度、不同营养、不同时间下的孢子萌发率
由表7所示，在PDB中，不同温度下的孢子萌发率不同，25oС为菌株T05分生孢子萌发的最适温度，与15、30、35oС对孢子萌发的影响有显著差异，而15、30、35oС之间对孢子萌发的影响不显著。由表8所示，3种培养液下的孢子萌发率各不相同，以在PDB中的孢子萌发率为最高，与2%蔗糖和自来水对孢子萌发的影响有显著差异，在没有营养的自来水中24h孢子不萌发。由表9所示，在PDB中，在8~24h的时间内孢子萌发率各不相同，接种后8h有15%的萌发率，在16~24h内萌发率为25.33%~46.12%，以24h孢子萌发率为最高，与8~20h时的萌发率有显著差异。
3结束语
长枝木霉菌株T05在PDA、MEA、查彼和基本培养基上都能生长，以在PDA上菌丝生长最快。在PDA上，菌丝生长的温度范围是15~35oС，最适温度为25oС；pH值的范围是4~10，最适pH值为6。在基本培养基上，菌丝生长的最佳碳源是葡萄糖、最佳氮源是蛋白胨、最佳维生素是VB1。分生孢子萌发需要一定的营养，当其分别在PDB、2%蔗糖水和自来水中时，以在PDB中的孢子萌发率为最高。在PDB中，分生孢子萌发的温度范围是15~35oС，最适温度为25oС；接种后8h就有15%的萌发率，在24h萌发率达到46.12%。综上所述，菌株T05对环境条件具有较宽的适应范围，分生孢子具有较强的萌发能力。
参考文献
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作者：池玉杰 伊洪伟 刘雷 单位：东北林业大学 重庆市农业科学院果树研究所
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