[酶都是蛋白质吗论文]检测SortaseA酶催化蛋白质连接效率的新型报

本文作者：李健；王鹏举；崔云凤；邹培建；秦刚；成功正常投稿发表论文到《生物工程学报》2014年02期,引用请注明来源400期刊网！

【摘要】：利用分子进化技术对SortaseA酶的催化活性进行定向改造已经成为当前的研究热点和重点,为了高效筛选特定催化活性的SortaseA酶突变体,需要建立一种能够快速准确鉴定SortaseA酶活性的方法。为此,设计了由GFP-LPETG蛋白和GGGYK-Biotin组成的新型报道底物系统。利用重组基因工程技术,成功制备GFP-LPETG蛋白,野生型SortaseA酶及近期报道的一个高活性突变型SortaseA酶。以GFP-LPETG及GGGYK-Biotin为报道底物建立连接体系,结果显示,连接反应动力学可直接通过SDS-PAGE凝胶电泳法精确测定。用此连接体系比较野生型与突变型SortaseA酶催化的连接反应效率,证实高活性突变酶具有野生酶无法比拟的高催化活性。此报道系统简单快速灵敏,可应用于系统的筛选,为后续进一步定向优化SortaseA酶奠定了基础。
【论文正文预览】：蛋白质连接技术广泛应用于生物医学工程领域,根据其反应特征可分为化学连接法和酶催化连接法[1–2]。目前,化学连接法在蛋白质连接技术中仍发挥重要作用,但存在制备工艺复杂、对蛋白质活性有损伤、连接产物不均一等问题,相比而言,以Sortase酶为代表的酶催化蛋白质连接法展现出
【文章分类号】：Q55
【稿件关键词】：SortaseA酶连接反应效率报道底物GFP-LPETG蛋白GGGYK-Biotin高活性突变体
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【稿件标题】：[酶都是蛋白质吗论文]检测SortaseA酶催化蛋白质连接效率的新型报道系统
【作者单位】：天津科技大学生物工程学院;中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室;
【发表期刊期数】：《生物工程学报》2014年02期
【期刊简介】：《生物工程学报》杂志是由中华人民共和国新闻出版总署、正式批准公开发行的优秀期刊，生物工程学报杂志具有正规的双刊号，其中国内统一刊号：CN11-1998/Q，国际刊号：ISSN1000-3061。生物工程学报杂志社由中国科学院主管、主办，本刊为月刊。自创刊以来，被公......更多生物工程学报杂志社(http://www.400qikan.com/qk/5081/)投稿信息
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