表达H120S基因膜外区段的重组鸡传染性支气管炎病毒的拯救

本文作者：魏衍全；郭慧琛；王海明；孙德惠；韩世充；孙世琪；成功正常投稿发表论文到《病毒学报》2014年06期,引用请注明来源400期刊网！

【摘要】：为探索以鸡传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)Beaudette毒株为骨架表达H120纤突蛋白膜外区的可行性,本研究利用RT-PCR技术,扩增得到H120纤突基因膜外区段(1302bp),将其置换到IBVBeaudette株全长cDNA克隆相应区段,构建了含有上述区段的重组IBVcDNA克隆BeauR-H120(S1)。然后直接将BeauR-H120(S1)作为DNA模板在体外转录出病毒基因组RNA,该转录产物电转入Vero细胞后48h收获细胞继续传代,直至第4代时出现合胞体,拯救获得一株重组IBV(rBeau-H120(S1))。通过RT-PCR方法证明rBeauH120(S1)基因组中包含有完整的H120纤突基因膜外区段。Western-blot试验证实rBeau-H120(S1)的N蛋白有表达,表明重组病毒在Vero细胞内进行了增殖。经连续传代后测定rBeau-H120(S1)的TCID50和EID50,结果显示,该重组病毒在Vero细胞中的滴度可达到105.90±0.22TCID50/mL,在9日龄SPF鸡胚中生长滴度为106.13±0.23EID50/mL。免疫保护实验表明,在接种重组病毒21d时,鸡群抗体阳性率达到90%,使用强毒株M41(103EID50/只)攻毒时免疫保护率为85%。本研究采用反向遗传操作技术构建的重组IBV,为进一步研制IBV重组基因工程疫苗奠定了基础。
【论文正文预览】：鸡传染性支气管炎(Infectiousbronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvi-rus,IBV)引起的一种急性、高度接触性传染疾病[1]。IBV对不同日龄的鸡均可感染,但主要侵害4周龄以下的雏鸡,临床以病鸡气管啰音、咳嗽、打喷嚏、肾脏苍白肿大、有大量尿酸盐沉积
【文章分类号】：S858.31
【稿件关键词】：传染性支气管炎病毒重组病毒纤突蛋白膜外区H株
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【稿件标题】：表达H120S基因膜外区段的重组鸡传染性支气管炎病毒的拯救
【作者单位】：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室;
【发表期刊期数】：《病毒学报》2014年06期
【期刊简介】：《病毒学报》杂志是由中华人民共和国新闻出版总署、正式批准公开发行的优秀期刊，病毒学报杂志具有正规的双刊号，其中国内统一刊号：CN11-1865/R，国际刊号：ISSN1000-8721。病毒学报杂志社由中国科学技术协会主管、中国微生物学会主办，本刊为刊。自创刊以来......更多病毒学报杂志社投稿信息
【版权所有人】：魏衍全；郭慧琛；王海明；孙德惠；韩世充；孙世琪；

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